yT&A clonong vector

Figure: Map and Sequence reference points of the yT&A cloning vector

Experimental Data：

The result of ligation using the control insert DNA and reagents provided in yT&A cloning kit.

*In this colony PCR, the size of the band on the gel is larger than the insert DNA size by about 150bp.

T4 DNA Ligase

說明  :

T4 DNA Ligase 可催化端點為blunt 及 cohesive的雙股DNA 或RNA 在5'-phosphate 及3'-hydroxyl端鍵結成phosphodiester bonds。可使用在 T-A cloning。

◎儲存溶液:

20mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM DTT, 50mM KCl, 0.1mM EDTA 及50% glycerol.

5X 反應溶液 :包含 Tris-HCl, MgCl₂, DTT, ATP (pH 7.8 at 25oC) 及PEG.

◎去活性 :65℃加熱10分鐘.

◎一單位定義 :

0.01 Weiss unit 定義為酵素的量能夠在16°C 20分鐘內催化1ug Hind III 處裡過的 Lambda DNA鍵結超過95%。

◎純度 :無核酸酶殘留被測得

◎其他資訊 :

1.Polyethylene glycol (PEG) 可加強blunt-ended DNA鍵結反應。

2.如果NaCl 或KCl 濃度超過200mM， T4 DNA ligase 將被嚴重抑制。

3.Ligation 反應另外需要ATP及 Mg⁺² 當輔酶。